[db-037] B70 : ニワトリ胚子・肢芽の筋発生

[hiranosg@med.niigata-u.ac.jp]

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#Z B70
#A ニワトリ胚子・肢芽の筋発生
#B The development of the muscles in the limb buds of chick embryos.
#E1 平野／茂樹
#F1 ヒラノ／シゲキ
#G1 Hirano／Shigeki
#J1 新潟大学医学部解剖学講座
#K1 ニイガタ ダイガク イガクブ カイボウガク コウザ
#L1 Department of Neurobiology and Anatomy, School of Medicine, Niigata
University
#E2 車田／正男
#F2 ノリタ／マサオ
#G2 Norita／Masao
#J2 新潟大学医学部解剖学講座
#K2 ニイガタ ダイガク イガクブ カイボウガク コウザ
#L2 Department of Neurobiology and Anatomy, School of Medicine, Niigata
University
#D 〔目的と方法〕四肢の筋の発生を検討するためにlacZ組み替えアデノウイル
ス（東京都神経科学総合研究所・岡戸晴生博士提供）による体節の標識と、肢芽の筋
原基細胞に発現するPax3の in situ ハイブリダイゼーション標本（奈良先端科学技
術大学院大学・高橋淑子博士提供）により肢芽の中に現れる筋芽細胞を観察し、肢芽
に筋を供給する体節のレベルと供給時期を検討した。またLacZ組み替えアデノウイル
スをH-Hステージ17〜21のニワトリ胚子の神経管内腔と、同一胚子の肢芽に一致した
体節にガラス針を用いて注入し、数日孵卵した後４％パラフォルムアルデヒドで固定
、X-gal反応液で発色後グリセリン透徹して全体標本とし、筋と神経の発生的関係を
検討した。
〔結果と考察〕肢芽にPax3発現細胞を供給する体節は腕神経叢・腰仙骨神経叢を形成
する分節と一致していた。H-Hステージ17で上肢芽間葉にPax3発現細胞が現れ、ステ
ージ19では下肢芽間葉にも広がっていた。しかしステージ20を過ぎると体節腹唇にPa
x3発現細胞は見られなくなった。体節をLacZウイルス標識した場合、上肢ではステー
ジ18、下肢ではステージ19までに標識した場合のみ、肢芽内に標識筋芽細胞が出現し
た。Pax3発現細胞は表皮と神経に挟まれた間に分布した。さらに下肢芽では前後の集
団に分かれているのが観察され、それが発生中の大腿神経と座骨神経の広がりに一致
していた。ステージ29においても、下方から腓骨筋群の原基を包むように広がる腓骨
神経から、筋に伸びる枝は観察されなかった。
 以上の所見から、筋原基細胞の肢芽内への移動は上肢では17〜18、下肢では19に起
こり、その移動は神経叢の発生と関連した機構によってコントロールされている可能
性がある。しかし両者の直接的な発生学的相互関連は認められず、未だ独自の発生を
進めている事が示唆された。
#M 肢芽、筋前駆細胞、細胞移動、筋節、ＬａｃＺ遺伝子組み替えアデノウイル
ス、Ｐａｘ３、
#N limb development, muscle progenitor cells, cell migration, myotome,
LacZ-recombinant adeno virus, Pax3
#T For the observation on the development of muscles in limbs, the labe
ling of somites with LacZ-recombinant adenovirus, and in situ hybridization
of Pax3 that expressed on the muscle progenitor cells for limbs were
performed on chick embryos (LacZ-recombinant adenovirus was given by Dr.
Okado, Tokyo Metro, Inst. Neurosci. and hybridized embryos were given by
Dr. Takahashi, Nara Inst. Sci. Tec.). The procedure of the labeling with
the adenovirus was as follows; At first, adenovirus-suspended buffer was
injected in the lumen of the spinal cord and in the somitocoeles by the
grass needle at H-H stage 17~21. After reincubetion, they were fixed with
4% paraformaldehyde in PBS. Then they were incubated in the substrate of
X-galactosidase, and were cleared in glycerin to make the whole mount
materials.
 Pax 3 in situ materials revealed that the level of the somites
served the limb buds with the muscle progenitor cells, corresponded to the
brachial and lumbosacral plexus. In H-H 17, Pax3 expression cells appeared
in upper limbs and in H-H 19, they appeared in lower limbs. Embryos at H-H
stage 20 or older, no Pax3 expressing cells were observed in the ventral
lips of somites faced to the upper and lower limbs. In the case of the
virus labeling of somites, labeled myoblasts appeared only when the
labeling was done before stage 19 (upper limbs) and 20 (lower limbs),
respectively. Further, tow groups of Pax3 expression cells were observed in
the hind limbs at stage 23. Femoral nerves developed under the anterior
groups and sciatic nerves developed under the posterior groups,
respectively. The labeling of the mesenchyme cells in the limb buds with
the adenovirus revealed that the shank muscles developed from the posterior
groups. Peroneal nerves prolonged under the surface of peroneal muscle mass
and extended to further distal of limb buds, however, no branches
projecting among the muscle fibers were observed. On the other hand,
sensory fibers terminated to the under surface of the skin. These
observations suggested that the migration of muscle progenitor cells
performed at H-H 17 and 18 in upper limbs and H-H 19 in lower limbs,
respectively. It was also suggested that their migration was controlled by
the same mechanisms of the formation of the neve plexuses. However, in the
present observations, the developmental relationships between the muscles
and the peripheral nerves could not be indicated.
#Last_modified 99.03.26-11:42
#Return_path hiranosg@med.niigata-u.ac.jp
#Sequence_number   37
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